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有7-10天(每天1次,共7-10天)、3次(连续给药3次,第一次和第二次间隔20小时,第二次和第三次间隔4小时)、2次(第一次给药2小时后以相同剂量重复)等。各种给药方法都是为了达到稳定的血药浓度,以利于药物作用机理的研究。但严格来说,应按药物半衰期给药,可连续5-7个半衰期达到稳定血药浓度。但由于中药及其复方成分复杂,半衰期难以测定,因此,7-10天的管理是一个权宜之计。如果研究药物血清的时效关系,在实验中应单独考虑(
1.3剂量(
,因为含药血清加入体外反应体系后会稀释浓度,无法达到体内药物浓度,反应体系可能出现假阴性反应。针对这种情况,李等提出根据新药药理研究的技术要求设计剂量,将含药血清制成冻干粉(冻干粉),以冻干粉的形式加入反应体系中,使其达到要求专注。刘平认为剂量应为整个模型动物的有效剂量(临床成人剂量的8-18倍)(
1.4采集含药血清(
一般情况下,给药1-2小时后大鼠血药浓度达到峰值。此时,血清是最好的含药血清。一天多,大部分药物成分已被代谢排出体外,药物的直接作用消失。此时,血清是机体功能状态的血清。当然,也要考虑例外情况,所以最好通过实验前(is
1.5血清灭活与否)来确定最佳采血时间(
许多学者对opi有不同的看法尼翁。一些含有该药物的血清在56岁时被灭活℃ 30分钟,但有些直接在体外测试,没有失活。刘成海等发现,无论灭活与否,正常大鼠血清都能维持大鼠肝贮脂细胞的贴壁生长。血清对肝贮脂细胞3H-TDR掺入的影响两组间无显著性差异。刘主张血清在56岁时灭活℃ 30min可消除非药物干扰。但徐海波等人认为,药物血清不应失活,血清失活后,机体在药物作用下产生的内源性活性成分会被破坏降低或丢失,生物活性降低,影响药理实验结果,与体内实验和临床用药不一致。对于血清非药物干扰,可用空白对照平衡消除,微孔膜灭菌
2也可预防细胞培养中的微生物感染中药血清药理学在我国的应用
2.1对单核细胞
产生内源性热原的影响)杨奎等采用探讨中药含药血清对黄芩、香薷的影响健胃生食汤和九味健胃丸对DNA、蛋白质合成率和Ca?兔单核细胞内源性热原产生过程中2的含量?讨论了2+内流的机理。结果表明,中药血清药理学方法在研究中药的时效关系方面具有很大的优势(分别观察了
2.2对肝贮脂细胞
增殖和胶原合成的影响)应用中药血清药理学方法研究扶正化瘀方对培养大鼠贮脂细胞功能的影响。结果表明,扶正化瘀方具有较好的抗肿瘤作用ld不仅能促进肝细胞增殖,还能显著抑制细胞凝胶的形成,观察血府逐瘀丸对实验性动脉粥样硬化兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响。结果表明,血府逐瘀浓缩丸在体内外均能抑制平滑肌细胞的增殖。血府逐瘀浓缩丸中含有抗平滑肌细胞增殖的有效成分,口服后有效。同时,血府逐瘀浓缩液的抑制作用血府逐瘀汤汤剂作用强于血府逐瘀汤血清,可能与某些有效成分不能从消化道吸收或体内代谢失活有关。本研究为血府逐瘀丸的临床应用提供了科学依据
2.4(
杨奎等的抗菌活性实验研究)采用中药血清药理学方法进行体外抗菌实验,结果表明,黄芩含药血清、藿香正气水含药血清和藿香正气液含药血清均有明显的抑菌作用,抑菌率均在70%以上。本研究发现,一些血清中含有trad传统中药能促进细菌的增殖,说明一些中药可能会降低人体抵抗外来病原体的能力。同时,研究还发现,无论是中药复方还是单味中药,都存在多个抗菌峰,说明中药的抗菌活性成分复杂,其吸收峰不一致,所以它们会被多次攻击以抑制繁殖。因此,中药血清药理学可能成为检测或反映中药不良反应的新方法
2.5对trach的影响)观察小青龙汤含药血清对离体豚鼠气管平滑肌的舒张作用。结果表明,小青龙汤治疗豚鼠血清对组胺引起的豚鼠离体气管平滑肌收缩有明显的抑制作用,且呈良好的量效关系。小青龙汤的体外药理作用与其直接煎剂相似。提示小青龙汤中抗组胺有效成分可经胃肠道吸收进入血液。有效成分的峰值时间约为2小时,说明了该方法的可靠性和可信度血清药效学实验在某些方面优于常规药理实验
2.6(
曾楠等对免疫功能调节的研究),观察雪莲虫草精华抗凝对大鼠NK细胞活性的影响。结果表明,含抗凝剂的药物能显著提高NK细胞活性。血清1.25g/kg组能提高IL-2活性,而7.5g/kg和3.75g/kg组作用不明显?但75g/kg剂量组有抑制作用,可能与血清及其含量的稀释有关采用中药血清药理学方法,对苦参仙鹤草及其水煎液含药血清对体外肿瘤细胞生长的影响进行ct扫描,发现苦参、仙鹤草及其水煎液含药血清具有明显的抗肿瘤活性,而仙鹤草含药血清无作用。初步证明,中药粗制剂有效,而含药血清无效,这可能与中药粗制剂的干扰因素、动物体内代谢过程以及血清等因素的影响有关。建议采用传统的血清药理学方法中药对评价中药的抗肿瘤作用有一定的意义
2.8对附子
的强心作用研究)陈昌勋等用血清药理学方法观察附子对离体豚鼠左心房收缩力的影响传统中医学。结果表明,与未用药的动物血清相比,口服附子粗提物后的动物血清能显著增强心肌收缩力,加快心肌收缩速度,血清的作用在给药后2h达到高峰。证明附子汤中确实含有卡生物活性成分,该成分对口服有效。附子血清和附子制剂对心肌的正性肌力作用相似,提示强心活性成分可通过胃肠道吸收到血液中,吸收后不会立即代谢
2.9对花生四烯酸
massomi等生物转化的影响,生姜、黄芩对花生四烯酸的生物转化有抑制作用,发现黄连、赤芍含药血清对花生四烯酸的生物转化有抑制作用,而其浓缩丸对花生四烯酸的生物转化有抑制作用汤剂无作用。说明这一过程是机体在药物作用下产生的内源性有效物质的作用(
综上所述,中药血清药理学作为一种新的药理学方法,为中药药理研究提供了一种新思路,为复方的深入研究提供了一条有效的、不可替代的途径,促进了中药药理学的发展,提高了体外实验的可信度和可靠性,使做以前做不到的研究成为可能。但作为一种新的实验方法论,它仍处于探索阶段,还存在许多问题,值得研究不够成熟。但可以预见,随着中药化学分析方法的进步、药代动力学的不断发展和血清药理学实验的深入发展,中药血清药理学面临的问题将一一得到解决,中药血清药理学的方法将不断完善,如与中药化学、药代动力学、免疫学、分子生物学、微生物学等研究紧密结合,将缩短中药现代化的进程