鸡胚的接种技术
鸡胚接种技术
鸡胚接种技术应用广泛，除了分离培养病毒、支原体和衣原体等病原体以诊断传染病外，还可用于病毒鉴定、效价测定，因此，掌握鸡胚接种技术对传染病的研究和防治具有重要意义，大多数病毒适合于9-12日龄的鸡胚。白色蛋壳是鸡胚的最佳选择，使用方便供观察。鸡胚应发育正常，健康活泼，蛋不宜过大、过小或畸形。鸡胚应来自健康无病的鸡群，不应含有能抑制接种病毒的母体抗体。接种前应选择SPF或非免疫鸡胚（
2卵位
，鸡胚应在卵子照明器下检查，选择死胚和弱胚。对于所有健康的胚胎，首先用红铅笔画出气室的位置，然后在胚胎侧面画出接种点（进针点）。接种点应避开大血管s、 靠近气室边缘，距胚头1cm左右（
3接种
可在卵位后开始。先用碘酊消毒接种部位和空气室，再用70%酒精去离子，然后根据需要用三角针或20针敲打蛋壳。尿囊腔接种：最常用的接种方法，新城疫、掉蛋综合征病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病病毒都可以采用这种方法。蛋壳消毒后，在气室上打一个小孔，然后在胚胎靠近气室的一侧打一个小孔。将带有5-7个针头的注射器插入hole约1.5cm，接种0.1-0.2ml接种物。将针放入蛋壳时，针与蛋壳的夹角应保持在30度℃, 针不应垂直放入蛋壳内。注射完毕后，立即用熔化的热石蜡将注射口和空气室上的小孔密封，37℃放回培养箱℃ 72-120小时（
绒毛尿囊膜接种：主要用于痘病毒、喉气管炎病毒、马立克氏病毒的分离培养。蛋壳消毒后，先在气室中打一个小孔，然后用电熨斗或钢锯片将蛋壳开一个小口子在靠近气室的胚胎一侧4毫米见方，并用刀尖小心撬开蛋壳，以免出血点损伤蛋壳膜而形成卵窗。蛋壳膜下的绒毛尿囊膜不受损伤。在针尖滴一滴无菌生理盐水或甘油，然后用吸头在气室的小孔上吸气，在胚胎中产生负压。此时，卵窗处的绒毛尿囊膜下沉，形成人工气室。此时，生理盐水或甘油能迅速渗透。用注射器在卵窗绒毛尿囊膜上滴入2-3滴接种液，用cellop密封卵窗录音带。用石蜡封闭气室小孔，接种鸡胚置于孵卵器中，卵窗向上（
卵黄囊接种：适用于马立克氏病毒、包茎病毒、衣原体和立克次体的分离培养。接种方法：将气室末端的蛋壳消毒后，在气室中心打一个小孔，用7针注射器垂直刺人约3cm，注射约0.1-0.2ml。卵用石蜡密封，37℃孵育℃ 每天转两次（
4）和观察
在37℃孵育℃ 接种后。鸡蛋一天照射两次，然后再进行去核处理随时取出ad胚胎。一般来说，24小时内死亡的胚胎大多是由外伤或细菌污染引起的。24小时后死亡的胚胎被取出，4小时冷藏℃ 并做了标记。接种后的潜伏期因病毒种类而异。一般新城疫病毒、支气管炎病毒、掉蛋综合征病毒、法氏囊病病毒孵化48-120小时，喉气管炎病毒、马立克氏病毒孵化48-96小时，痘病毒孵化4-5天，脑脊髓炎病毒孵化至雏鸡孵化（
5）接种的鸡胚应取出培养箱，4℃冷冻℃ 大约36个小时，或者在零下10点结冰℃ 孵化后4个小时左右，但鸡开始发情os不宜冷冻，否则易发生溶血。冷冻后，按照以下步骤收集毒物。鸡胚放在蛋盘或蛋架上，气室向上。用碘酊和酒精消毒后，用无菌镊子敲开气室内的蛋壳或取下人工卵窗的透明胶带，露出卵膜。小心不要让蛋壳碎片落入鸡胚中。尿囊液：打开气室后，用无菌眼钳慢慢撕下蛋壳膜，然后夹住绒毛尿囊膜，轻轻提起，用巴氏移液管穿刺绒毛尿囊膜直接吸收尿囊液。为防止羊膜堵塞吸引管口，可用镊子将羊膜和胎膜压下，再吸吮。每个胚胎可接受约8毫升尿囊液。羊水：吸取尿囊液后，可用镊子夹住羊膜，将巴氏移液管直接插入羊膜腔吸取羊水，再用镊子提起羊膜或按压胎儿直至羊水取出。相当一部分病毒可以与羊水和尿囊液混合。如果有些可以混合，则应收集并分开释放热烈欢迎。绒毛尿囊膜：如果想收获整个尿囊膜，可以消毒，打开蛋壳，撕下蛋壳膜，倒出整个鸡蛋内容物，然后将绒毛尿囊膜贴在蛋壳内壁，用镊子将其撕下。胚胎：消毒后打开空气室中的蛋壳，用镊子撕开蛋壳膜和绒毛尿囊膜，夹紧胚胎，用剪刀剪下卵黄带，将胎儿放入灭菌容器（
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