马立克氏病防治技术规范
马立克氏病（MD）是由疱疹病毒家族引起的α 马立克氏病病毒（MDV）的一个亚群是家禽的一种传染病，其特点是危害淋巴系统和神经系统，引起周围神经、性腺、虹膜、各种内脏、肌肉和皮肤的肿瘤。为预防、控制和消灭马立克氏病，被列为我国第二类动物疫病（
，根据《中华人民共和国动物防疫法》及其他有关法律法规（
1适用范围
，制定本标准。本规范规定了动物的诊断技术、疫情报告、疫情管理和预防措施马立克氏病（
本规范适用于所有从事家禽养殖、销售、生产、销售家禽产品的单位和个人，在中华人民共和国境内从事动物防疫活动的，可以根据流行病学特征、临床症状、病理变化等作出初步诊断，诊断必须是病原分离鉴定或血清学诊断（
2.1流行病学
鸡是主要的自然宿主。鹌鹑、火鸡、雉鸡、乌骨鸡也可发生自然感染。小于2周龄的雏鸡最易感病。6周龄以上的鸡可出现临床症状ptoms最严重的是12-24周龄（
感染鸡，感染鸡是主要感染源。呼吸道是感染的主要途径。成熟病毒在毛囊上皮细胞中可随羽毛和去角质皮屑扩散。该病毒对外界有较强的抵抗力，在室温下可传染4-8个月（
2.2临床症状
本标准规定该病的潜伏期为4个月（根据临床症状可分为神经型、内脏型、，眼型和皮肤型（
神经型：最早的症状是运动障碍。一般腿和翅膀完全或不完全瘫痪，表现为曼斯为“分裂”型，翅膀下垂；内脏型：常表现为极度抑郁，有时无任何症状而猝死。部分病鸡出现厌食、消瘦、昏迷等症状，最终死于疲劳（
眼型：视力丧失或消失。虹膜失去正常色素，呈同心环状或斑点状。瞳孔边缘严重期，仅剩一个针头大小的瞳孔（
皮肤型：全身皮肤毛囊肿胀，尤其是大腿外侧、翅膀和腹部（病程一般为数周至数月）。不同感染株、不同易感品种的鸡死亡率为2%～70%(神经类型：病变多见于翼丛、坐骨丛、坐骨神经、腰骶神经、颈迷走神经等，病变神经可比正常神经粗2-3倍，横纹消失，呈灰白色或淡黄色。有时可见神经淋巴瘤（
内脏型：肝、脾、胰腺、睾丸、卵巢、肾、肺、腺胃、心脏等广泛结节或弥漫性肿瘤（
眼型：虹膜失去正常色素，出现同心圆或斑点。瞳孔边缘不规则。严重期仅剩一个针头大小的瞳孔（
皮肤型：常见毛囊为swollen，大小不同，融合在一起形成浅白色结节，特别是去除羽毛后（
2.4实验室诊断
2.4.1病原体分离鉴定（见附件1）
2.4.2组织病理学诊断
主要集中于淋巴母细胞的增殖和浸润，大、中、小淋巴细胞和巨细胞，而小淋巴细胞和浆细胞的浸润及雪旺细胞的增殖（
2.4.3免疫诊断
免疫琼脂扩散试验（见GB/T 18643）（
2.5鉴别诊断
内脏马立克氏病的病理改变容易与禽类混淆白血病（LL）和网状内皮组织增生症（RE）（
2.5.1和d禽白血病（LL）的鉴别诊断
2.5.1.1流行病学比较
禽白血病（LL）一般发生在16周龄以上的鸡，多发生在24～40周龄之间；且发病率低，一般不超过5%。MD死亡高峰多发生在10～20周龄，发病率高
）
2.5.1.2组织病理学改变
禽白血病（LL）肿瘤的组织病理学改变主要表现为大小相同的淋巴母细胞的增殖和浸润。MD肿瘤细胞主要为不同大小的淋巴细胞（
2.5.2）和不同部位的网织内增殖病（RE）鉴别诊断
网织内增殖病（RE）鸡感染率差异较大，一般发病率较低。肿瘤细胞的组织病理学特征为：肿瘤细胞多为未分化的大细胞，胞浆较多，细胞核苍白。一些病例还表现出不同大小的淋巴细胞（
MDV和rev共感染在野外形成混合瘤很常见，结果2.6.1疑似马立克氏病临床诊断符合流行病学2.1标准，临床症状2.2标准，尸检2.3结果2.6.2确诊符合结果判定2.6.1标准，符合实验室诊断2.4.1; 或者按照2.4.2和2.4.3（
3疫情报告
3.1的规定，任何单位或者个人发现家禽患有或者疑似该病的，应当在接到疫情报告后立即向当地动物防疫监督机构（
3.2）报告，地方动物防疫监督机构根据流行病学特点、临床症状、尸检病灶，结合病原菌分离鉴定，执行《全国动物疫情报告管理办法》
4《疫情管理办法》
的有关规定，组织病理学和免疫学检测，诊断结果可作为临床诊断的依据疫情管理（
4.1当发现疑似马立克氏病暴发时，养殖户应立即隔离病禽并限制其活动。当地动物防疫监督机构应当及时派人到现场进行调查核实，包括流行病学调查、临床症状检查、病理解剖、疾病资料收集、实验室诊断等。，并根据诊断结果采取相应措施（
4.2当疫情为散发性时，对病禽和同一组禽鸟应进行屠宰和无害化处理（按gb16548）。同时，鸡舍及周边环境对环境进行消毒，并对受威胁的鸟类进行观察检查（
4.3疫情暴发时，应遵循以下要求：
4.3.1划定疫点、疫区和受威胁区
疫点，疫区、威胁区由县级以上兽医主管部门划定（
疫点：指病禽所在地。一般是指病禽所在的家禽养殖场（户）或其他相关屠宰经营单位；如果是农村地区的自由放养，则应将自然村定为疫区（
疫区：指3公里以内的区域f疫点的扩展。当地的繁殖环境和自然屏障（如河流、山脉、，
威胁区：指在动物防疫监督机构的监督指导下，在疫区范围（
4.3.2处置要求（
5公里以内的区域，对病禽和同一组禽鸟进行屠宰，对屠宰和死亡的禽鸟进行无害化处理；对环境和设施进行消毒；粪便和其他可能被污染的物品按GB 16548进行无害化处理；禁止在疫区内移动或买卖易感动物ic区域（
需要运输家禽尸体时，防漏容器应在动物防疫监督机构的监督下使用和实施（
4.3.3重点分析和流行病学调查
4.3.4处理记录
必须对疫情处理的全过程进行完整详细的记录检查（
5防控（
落实“免疫优先”综合防控措施（
5.1加强饲养管理，提高环境治理水平
饲养、生产、，营业场所和其他场所必须符合《澳元管理办法》的要求全面了解动物防疫情况（农业部令第15号）并取得动物防疫合格证（
饲养场实行全进全出饲养模式，控制人员出入，严格执行清洁消毒程序
5.2加强消毒管理，做好基本防疫工作
各养殖场要建立严格的卫生（消毒）管理制度，屠宰场（场）和动物防疫监督检验站（
5.3免疫接种
应在雏鸡孵化后24小时内进行。使用的疫苗必须是t国务院兽医部门
5.4监测
养鸡场从其他地方引进种禽，应当记录死鸡发生肿瘤的情况，接受动物防疫监督机构
5.5引进检疫
的监督在中国，由引进地动物防疫监督机构审批，并取得产地动物防疫监督机构的疫苗接种证明和检疫证明（
附件1
马立克氏病病原分离
1细胞作为MDV分离诊断材料
1.1细胞源
应取自病鸡全血（抗凝）白细胞层或死鸡脾细胞（
1.2方法
1.2.1将白细胞或脾细胞制成含106-107个活细胞/ml的细胞悬液（
1.2.2将0.5ml样品接种于2瓶（25 cm 2）中SPF鸡胚成纤维细胞。另一瓶作为空白对照（
1.2.3将接种和未接种的对照细胞培养瓶置于37.5℃ 含5%二氧化碳的培养基° C二氧化碳培养箱（
1.2.4每三天更换一次培养基（
1.2.5观察3-4天内是否出现CPE或斑块。否则，可盲目传输1-2代用ons（
2羽毛浆作为分离诊断MDV
的材料，本方法分离的病毒为非细胞病毒，但不常用（
2.1取长约5mm或含有皮肤组织的羽毛浆，放入spga-edta缓冲液[0.2180m蔗糖（7.462g）]；0038m磷酸二氢钾（0.052g）；0072m磷酸二氢钠（0.125克）；0.0049ml-谷氨酰胺（0.083g），1.0%血清白蛋白（1g），0.2%EDTA（0.2g），100ml蒸馏水，过滤灭菌，调节pH至6.3（
2.2病毒分离和滴定方法
悬浮液经超声波处理，通过0μ 过滤后，将细胞接种于鸡肾细胞培养基上红色持续24小时。吸附40分钟后，加入培养基，按上述方法培养7天（
3上述方法可用于分离MDV 1型和MDV 2型
，疫苗病毒也可以分离（
经验丰富的工作人员可以根据时间、发展速度和菌斑形态准确识别由各类病毒引起的菌斑。HVT菌斑出现早于1型，且大于1型，而2型菌斑出现晚于1型，且小于1型（
附件2
消毒
1消毒前准备
1.1消毒前，必须清除有机物、污垢、粪便、饲料和床上用品(
1.2必须选择对马立克氏病病毒有效的消毒剂，如烧碱、醛类、氧化剂、酚类制剂、氯制剂、双季胺盐等（
1.3配备喷雾器、火焰喷枪、消毒车，消毒及防护用具（如呼吸器、手套、防护靴等）、消毒容器等
1.4注意，消毒剂不得混用
）
2消毒范围
鸡舍地面、内外墙、外环境；食物、饮用水和其他器具、运输和其他设施和设备，以及所有其他可能受到污染的场所和设施（
3）感染方法
3.1金属设施和设备可通过火焰、熏蒸和其他方法进行消毒（
3.2外壳，场地和车辆可采用清洁和喷洒消毒剂消毒（
3.3家禽养殖场的饲料和垫料可采用深埋发酵或焚烧消毒（
3.4粪便可采用堆放消毒，密闭发酵或焚烧（
3.5养殖管理人员可淋浴等消毒方法（
3.6衣帽鞋等可能被污染的物品可浸泡消毒，高压灭菌和其他方法（
3.7宿舍和公共场所的办公室和饲养人员疫区公共食堂等场所可采用喷雾消毒（
3.8对疫区屠宰、加工、储存等场所及池塘等水体可采用相应方法进行消毒，避免有害物质污染（
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