免疫鸡卵黄抗体研究进展
卵黄抗体（IgY）是指从免疫卵中提取的特异性抗原抗体。自1893年Klemperer首次报道卵黄中存在抗体以来，卵黄抗体的研究不断深入。目前，对卵黄抗体的形成和生物学特性的研究已十分清楚。卵黄抗体作为一种诊断试剂和预防药物，越来越受到人们的重视。本文综述了免疫鸡卵黄抗体的研究进展（家禽的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别由胸腺和法氏囊控制）。当机体受到外来抗原刺激时，法氏囊中的B细胞分化进入浆细胞并分泌特异性抗体进入血液循环。当血液流经卵巢时，特异性抗体（主要是IgG）逐渐积聚在卵细胞内，形成卵黄抗体；当卵细胞分泌到输卵管时，流经输卵管的血液中的特异性抗体（主要是IgA和IgM）进入卵白形成卵白抗体。IgG向卵细胞的迁移是受体作用的结果，因此IgG在卵细胞中积累，其浓度高于血液中的浓度。与卵黄抗体相比，卵细胞在输卵管中的迁移时间较短，因此卵白抗体的含量很低。卵黄抗体逐渐进入blo鸡胚在孵化过程中的od值，为新孵化的雏鸡提供被动免疫保护。它在雏鸡疾病预防中起着重要作用，但也干扰了鸡疫苗的免疫效果
2和
IgY的性质与哺乳动物IgG相似）。正常鸡IgY分子量约180kda，由两条轻链（2L）和两条重链（2H）组成。分子量分别为60-70kda和22-30kda。其等电点约为5.2（与哺乳动物IgG相比，IgY具有更强的耐热性、耐酸性、离子强度和一定的抗酶降解能力（结果表明，IgY在75℃下具有良好的热稳定性）℃.IgY活性在4℃保存后没有变化或下降℃ 5年或室温下6个月。IgY活性在65℃时维持在24小时以上℃ 在70℃加热后下降60%℃ 90min试验结果表明，30min对IgY无影响；80岁以上℃, IgY在ph4.0～11.0时活性稳定，在ph3.0～3.5时活性迅速下降，在ph12时活性下降（
IgY对胃蛋白酶有很强的抗性，但对胰蛋白酶非常敏感。ph2.0孵育1h后，胃蛋白酶和IgY的活性几乎全部丧失，而ph4.0孵育1h后，胃蛋白酶和IgY的活性仍为91%，孵育10h后仍为63%。当伊吉用胰蛋白酶和凝乳酶孵育8h，IgY的活性分别保持在39%和41%（作用机制
3和IgY
）特异性病原体的卵黄抗体能直接粘附在病原体的细胞壁上，改变病原体细胞的完整性，直接抑制病原体的生长；卵黄抗体能粘附在细菌的菌毛上，使其不能粘附在肠上皮细胞上；一些卵黄抗体在肠道消化酶的作用下降解为结合片段。这些片段含有抗体的可变小肽（FAB）。这些肽很容易被肠道吸收，进入血液后能与特定的病原体粘附因子结合，因此病原菌不能粘附于易感细胞而丧失致病性，而IgY的稳定区（FE部分）留在肠内（方法
4、IgY分离纯化
卵黄的主要成分是蛋白质和脂肪，比例为1:2，蛋白质多为脂蛋白，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，仅卵黄蛋白（α、β、γ) 它是水溶性的，IgY是γ 卵黄蛋白。因此，分离纯化IgY首先需要有效去除卵黄中的脂质，从水溶性蛋白中分离IgY（多年来，人们建立了许多高效、经济的方法，主要有peg、葡聚糖硫酸酯、天然胶如海藻酸钠、卡拉胶或乙醇等）沉淀法
1980年，Polson首次提出了聚乙二醇（PEG）的两步沉淀法，PEG的最终浓度分别为3.5%和12%。1985年，在此基础上提出了一种改进的冷乙醇沉淀法，不仅提高了收率，而且有效地去除了残留的peg。1981年，jensensius等人提出了硫酸葡聚糖沉淀法（DS法）。PEG法和DS法的产率相近，但提取的IgY产物中含有一定量的杂蛋白。Bade和Stegemann（1984）使用预冷丙烷和丙酮（-20℃) 沉淀蛋白质和去除脂质。经DEAE柱层析进一步纯化从形态学上看，bade和Stegemann（1984）纯化的IgY与Polson法纯化的IgY活性无显著差异，稳定性好。冻融3次以上后，IgY活性无明显变化。1992年，秋田等人用水稀释法（WD）纯化IgY。从每个卵黄中可获得超过100mg的IgY。之后，Akita等人比较了WD法、PEG法、DS法和黄原胶法的纯化效果，结果表明WD法的收率最高，其次是DS法，WD法更适合于1993年大规模生产（
，Horikoshi提出了冷乙醇分馏离心法，采用60%，3分别用0%和25%冷乙醇沉淀离心，得到纯度大于99%的IgY。本方法适用于IgY（
的大规模制备工业上大规模生产IgY的方法有超临界二氧化碳萃取法，卡拉胶提取和硫酸铵盐析（IgY在动物疾病防治中的应用）5.1 IgY在动物疾病防治中的应用
研究表明，IgY能抵抗幼年动物肠道中胰蛋白酶和糜蛋白酶的消化。因此，常在幼畜饲料或添加剂中添加一定量的针对某些特定疾病的IgY，以获得有效的被动免疫尼蒂。何月英等用小鹅瘟强毒株制备的卵黄抗体对2～3日龄小鹅进行了预防，保护率高达100%。杨晓梅等用鸭病毒性肝炎Ⅰ型鸡胚病毒免疫鸡，制备了鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体。卵黄抗体用于预防时，雏鸭平均成活率为96.9%
5.2应用于动物疾病的治疗目前，卵黄抗体已被广泛应用于多种疾病的预防和治疗。用抗鸭病毒性肝炎（DHV）卵黄抗体治疗人工感染的鸭，其保护率可达100%他用了10000倍LD50强的病毒。治愈率95.2%。此外，用多种病原体免疫制备的卵黄抗体还可以预防和控制多种病原体的感染。詹丽娥等用IBD、Nd和EDS-76三高免疫卵黄抗体治疗上述三种疾病，总有效率50%以上。在日本，成功地从鸡蛋中提取了能杀灭幽门螺杆菌的抗体，并用该抗体制备了能杀灭人体幽门螺杆菌的酸奶（
。用卵黄抗体治疗疾病是安全、有效、无污染的。我国目前已有蛋黄抗体（
5.31gy）用于动物诊断卵黄抗体与哺乳动物免疫球蛋白有许多不同之处，如不与金黄色葡萄球菌a蛋白结合，不与哺乳动物Fc受体结合，对哺乳动物补体无固定作用，使卵黄抗体在检测和诊断上更具特异性和敏感性，卵黄抗体可用于免疫荧光检测、ELISA检测、免疫扩散、免疫电泳等。郑厚静等用蛋黄琼脂扩张试验检测蛋黄中IBD抗体水平。结果表明，用卵黄琼脂扩增试验代替血清琼脂扩增试验检测IBD抗体水平是可行的，经济、省力、省时惯性导航与制导。此外，卵黄抗体有望取代传统生产的多克隆抗体，获得大量更有效的抗体，减少对动物的副作用，提高动物的福利（
6，IgY的发展前景
IgY作为一种新型饲料添加剂代替抗生素正引起人们的关注，IgY代替抗生素作为生长促进剂，不会产生药物残留，是一种安全的绿色添加剂（
生产技术相对成熟：利用鸡卵黄生产多克隆抗体是近年来抗体制备技术的一个新的研究领域（
IgY产量高、价格低（利用IgY技术制备免疫球蛋白可以降低应力）提高动物的福利。（
老年动物可导致IgY失活，但通过包埋可以避免这一问题。Shimizu等人（1993年）用脂质体包裹IgY，并在pH值为2.8的胃蛋白酶中37℃培养1小时℃, 卵黄免疫球蛋白是一种高产、高质量的多克隆抗体，鸡的大规模工业化饲养成本低、经济、方便，制备工艺相对简单。因此，IgY在生物制品开发和疾病防治方面具有广阔的前景。卵黄抗体在疾病防治中的应用它也有不可避免的缺点，例如对家禽业的潜在威胁（
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