牛传染性鼻气管炎的病原 牛传染性鼻气管炎的诊断和防治
牛传染性鼻气管炎是由牛疱疹病毒和鼻病毒引起的一种急性、高温、高度接触的呼吸道传染病。病毒入侵牛后，会导致牛的持续感染，感染牛的感染时间长甚至终生，给控制和消除该病带来很大困难。让我们了解一下：牛传染性鼻气管炎的病原体，牛传染性鼻气管炎的诊断和预防（
1.发生和传播的病原体
是疱疹病毒家族的牛疱疹病毒1型。该病毒对热敏感，加热至50℃21min后死亡。常用消毒剂，如0.5%氢氧化钠溶液、5%甲醛溶液在溶液和1%石炭酸中，可在几分钟内使其失活。该病的主要传染源是感染牛和隐性感染牛。该病毒不时随受感染牛的鼻液、眼液和阴道分泌物排出。有些牛在康复后感染病毒超过17个月。而隐性病毒的存在，使得牛的一种传染病很难在长时间内传播。易感牛通过吸入污染的空气和飞沫通过呼吸道感染。病牛的精液可以携带病毒，因此可以通过交配感染。在冷冻精液中，病毒可以存活4~12个月（
2.临床特征
该病潜伏期为3～7天，有时超过3周。由于受病毒侵袭的器官不同，临床表现出不同的类型，但通常在不同程度上同时发生，很少单独出现（
呼吸型。它是最常见的疾病类型，有时表现为轻度感染，只有流鼻涕和眼泪。它也可能是一种非常严重的疾病。病牛情绪低落，食欲不振，体温升高（40℃以上），流涎、流泪、鼻腔粘液脓液多。鼻腔粘膜充血，散在灰黄色粟粒和大脓疱颗粒，其次为浅溃疡。频繁咳嗽，呼吸增强口粮和浅表（
生殖器官型。① 奶牛：这种类型主要见于性成熟的奶牛。当奶牛患上这种疾病时，主要是传染性脓疱性外阴道炎。病牛不安地摆动，频繁地抬起尾巴，外阴红肿，并分泌粘液脓性分泌物。阴道粘膜内有灰白色脓疱伴大粟粒。大量小脓疱形成典型的颗粒状外观。小脓疱相互融合形成一层宽大的假膜，脱落形成浅溃疡，产奶量降低。② 牛：疾病类型以感染性脓疱性包皮龟头为主要疾病。阴茎和包皮水肿，小脓疱或溃疡，脱发大多数病牛精囊腺的再生和坏死。结果，公牛失去了繁殖和繁殖的价值。即使他们康复了，也会长期中毒，必须坚决杜绝（
流产型。一些病毒株可以侵入胎盘和胎儿并导致流产，这在第一次怀孕的牛中很常见。流产可以发生在怀孕的任何阶段。流产率为20%～2%。疾病类型可能与上述两种疾病类型复杂，也可能导致突然流产而没有任何其他症状（
肠炎类型。以2～3周龄犊牛多见。病牛主要是呼吸道症状，也可能导致腹泻，甚至粪便中有血。凡人犊牛的死亡率可达20%～80%
型脑膜脑炎。4至6个月龄的小牛最有可能在出现上呼吸道症状后3至5天出现神经症状；共济失调、肌肉震颤，甚至倒地、抽搐、抽搐和角紧张；兴奋与抑郁交替发生，病程约5～7天。这种类型的发病率很低（1%-2%），但死亡率很高（50%）
）
角膜结膜型。这种类型通常伴有呼吸型。轻度病例有牛眼睑水肿、结膜充血及大量泪液；重病牛眼的结膜表面形成一层灰白色的假膜，并带有颗粒状外观。严重病例，角膜白色浑浊，一般无溃疡和粘膜脓性分泌物（
3.病理尸检
不同临床类型有不同的病理改变。主要病变是严重的呼吸道粘膜炎症，浅溃疡，覆盖着灰色和恶臭的粘液脓性渗出物。继发细菌感染，支气管肺炎也可见。生殖道类型变化与临床表现一致。流产胎儿皮肤水肿、出血，肝、肾和淋巴结有小坏死灶。非化脓性脑炎可见于脑膜脑炎（
4.诊断要点
初始诊断根据上述临床症状和病理特点可作出诊断。最可靠的诊断方法是通过实验室诊断来检测病毒的存在。用消毒棉签蘸取疑似感染牛的鼻腔分泌物、泪液、生殖道分泌物、牛精液，以及流产胎儿的胸水、气管、肺、肝、脾等疾病材料，妥善保存，送相关实验室诊断；或感染性牛鼻气管炎核酸探针用于检测。中和试验是最常用的血清学方法。在急性期和恢复期可分别服用一份血清中和抗体可维持5年（
5.预防和控制计划
防止传染源向牛传播是预防该病的关键措施。禁止从已知疫区引进牛。如果确实需要引进牛，必须对引进的牛进行隔离检疫3周；种牛应进行精液检测，确认无疾病后，方可进行混种，以参与繁殖。一旦发生疾病，应立即采取隔离措施。国外已经生产了减毒疫苗，除怀孕母牛和种牛外，其他都可以使用。只有5~7个月龄的小牛在old疫区都接种了疫苗。怀孕的母牛和公牛可以接种灭活疫苗。据报道，免疫期可达3年。康复后的牛可以终身免疫。犊牛吮吸复原初乳可获得2～4个月的被动免疫。然而，据报道，使用疫苗无法预防持续感染，因此认为杀死患病牛是最有效的控制方法。牛传染性鼻气管炎
的病因牛传染性鼻气管炎（IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（ibrv）或牛Ⅰ型疱疹病毒（bhv-I）引起的。Ibrv属于疱疹病毒a亚家族分类中的美国家庭。病毒呈球形，有荚膜。成熟病毒颗粒直径约150～220nm。它主要由核心、衣壳和蒴果组成。核心由双链DNA和蛋白质组成。包含基因组的核衣壳是一个具有六边形外观的立体对称二十面体，162个壳和围绕其的含脂胶囊。双链DNA分子量为8.4x106，其中G+C含量为72%，漂浮密度为1.731g/cm。Ibrv基因组是一个138kb的线性双链DNA分子，分为特定的长区（UL，106kb）和短区（US，10kb）。后者被两个反向重复所包围（IRS和TRS为11KB）中国）。因此，短区域可以反转方向，使病毒DNA具有两个异构体。据估计，ibrv基因组可编码约70种蛋白质，其结构和功能目前已知最多。鱼精蛋白基因存在于病毒囊膜的GB、GC、Gd和Ge的四个主要部分，已在哺乳动物中测序和表达。GB在哺乳动物细胞中的表达表明，它引起细胞融合和多核苷酸的形成，这是病毒复制所必需的；GC对病毒吸附的组织培养细胞很重要，但在牛细胞中的表达不影响病毒斑点的数目和病毒的存在；GD被认为是病毒颗粒表面的主要分子病毒感染的细胞。抗抗体糖蛋白的单克隆抗体在病毒吸附后中和病毒，并显示出较高的中和滴度，表明GD可能参与病毒进入细胞并复制病毒的非必需基因。小鼠和牛的免疫试验表明，GD可诱导比GB和GC更强和持久的细胞免疫（
诊断
这种疾病的典型病例（上呼吸道炎症）具有特征性症状，如鼻粘膜充血、脓疱、呼吸困难和鼻脓。结合流行病学，可以做出初步诊断，但诊断必须依赖于实验室诊断，包括病毒分离和鉴定以及血清学检查逻辑测验。检测血清中BHV1抗体的常用方法有病毒中和试验（VN）和各种酶联免疫吸附试验（ELISA）。此外，还有琼脂扩散试验和间接血凝试验。由于病毒潜伏期通常发生在ibrv感染后，因此识别血清阳性动物是检查动物感染状况的一个非常有用和理想的指标。抗体阳性动物可被视为病毒携带者和潜在的间歇性解毒，除了从初乳中获得母体抗体的小牛和用灭活疫苗免疫的未感染牛（
（I）病毒中和试验
外，中和试验基于感染的测定病毒的残余传染性，并在比较免疫血清中和的病毒残余传染性的基础上确定免疫血清中和病毒的能力。它被认为是血清抗体检测的最标准方法。Ibrv只有一个血清型。只要存在已知标准株的免疫血清，敏感细胞培养后可通过中和试验进行鉴定。然而，该方法耗时、费力、测试周期长，易受不确定因素的影响，如病毒价格的准确性、细胞数量和病毒/血清的不同培养时间等因素将直接影响中和试验的结果。目前,正在逐步进行将酶
与酶联免疫吸附试验
中的酶
结合。这些酶标记物仍然保持原有的免疫活性和酶活性。它能与吸附在固相载体上的抗体特异性结合。滴加底物溶液后，底物在酶的作用下，能将其中所含的供氢体由无色还原型转变为有色氧化型，发生显色反应。因此，是否有相应的免疫反应可以通过底物的显色反应来判断。显色反应的深度与t细胞中相应抗体的量成正比他收集了一些样品。该显色反应可由ELISA检测器定量测定。ELISA法具有快速、灵敏、简便、易于标准化等优点，已被推广应用，成为进口大量动物的首选方法。但经过长期应用，市场上商品化的ELISA试剂盒或多或少存在质量问题，假阳性或假阴性概率高，检疫质量难以保证，而且进口试剂盒价格普遍偏高，这实际上增加了检疫的成本（
（III）琼脂扩散试验
被测血清中的沉淀抗体可以用已知的方法检测出来IBR抗原，以及疾病样本或细胞培养物中的相应抗原也可通过IBR阳性血清（
（IV）间接血凝试验
将已知抗原与鞣酸处理的绵羊红细胞结合，用常规试管凝集或微量凝集法检测检测血清中相应抗体，是一种简便、快速、实用的诊断方法。由于ibrv的潜在传染性，自然感染牛的中和抗体滴度仅在感染2周后达到峰值，在感染2周或4周后逐渐降低，并可能降至零，进入潜在感染期。之后，一旦受到应激因素的刺激，抗体滴度就会下降再次补充硒并解毒。在这种重复之后，IBR感染牛的抗体滴度也呈波浪式波动。因此，即使用中和试验或ELISA法检测牛的IBR抗体为阴性，也很难保证牛不感染ibrv。因此，可以认为判断畜群是否有ibrv感染的最基本方法应该是检测IBR抗原（
（V）病毒分离鉴定
1。样品采集与处理：从感染牛的早期鼻拭子中采集。对于外阴道炎和**炎症的病例，取生殖道拭子，用拭子刮在生殖道阴道粘膜表面，**用清水冲洗包皮取生理盐水，收集洗液。所有样品应悬浮在运输培养基（含有抗生素和2%小牛血清的组织培养基）中，储存在4℃下，并迅速送至实验室。样品送至实验室后，将拭子在运输介质中充分搅拌洗脱病毒，室温放置30分钟，取出拭子，运输液以1500 R/min离心10分钟，取上清液作为样品进行病毒分离。用于病毒分离的精液需要特殊处理，因为精液中含有对细胞有毒或抑制病毒增殖的酶和其他因素（
2.病毒分离：多种细胞可用于ibrv隔离。从牛胎肺、鼻甲或气管制备的细胞系和已建立的传代细胞系（如MDBK细胞）是合适的。当使用24孔塑料培养板时，每个孔需要接种细胞培养上清液100μl～200μl。吸附1h后，倒出液体，加入保养液。每天观察细胞病变。一般情况下，CPE发生在接种后3天。细胞的典型变化是圆形收缩，聚集成葡萄状群落，在单层细胞上形成孔洞，有时发现有多个细胞核的巨细胞。如果CPE在7天后未出现，则应再次盲传。反复冻融后，培养物e应离心，其上清液应用于接种新的单层细胞以进一步分离病毒。为了确定引起细胞病变的病毒是否是ibrv，细胞培养上清必须用特异性ibrv抗血清中和或单克隆抗体（mAb）（
（VI）免疫荧光试验
检测结膜接触膜上的ibrv，组织切片和细胞培养涂片
（VII）PCR
1993年，vilcek使用聚合酶链反应（PCR）诊断IBR。结果表明，PCR比病毒分离法更敏感，阳性检出率是病毒分离法的5倍。甚至有三个分子的病毒也能被检测出来。因为它的灵敏度高，可用于牛血清中微量元素的检测，已被广泛应用。因此，将PCR技术应用于进出口牛传染性鼻气管炎病毒的检疫，将大大降低检疫成本和检疫周期，有效提高检出率，对打破技术性贸易壁垒发挥巨大作用，促进中国对外贸易的进一步发展，保护中国畜牧业生产安全临床症状自然感染的潜伏期一般为4-6天。如果是人工感染（气管内、鼻内、阴道滴注接种），潜伏期可缩短至18-72天小时，可显示以下临床类型：
（I）鼻气管炎最常见的症状，轻度和重度。发病初期，高热（40-42℃）、智力低下、厌食、流泪、流涎和鼻腔粘液脓性液体。牛奶产量突然下降。鼻粘膜高度充血，火红，轻度粘膜坏死。呼吸非常困难，呼出的气体很臭，咳嗽也不常见。一般来说，症状在大约10-14天后消失（
（II）感染性脓疱性阴道炎开始时有轻度发热，对食欲没有影响，产奶量也没有明显变化。这些动物在u型呼吸暂停时由于疼痛而表现出不安、尿频和高尾巴反辐射。外阴及阴道粘膜充血、潮红，有时粘膜上散有灰黄色、小米黄色脓疱，阴道内可见大量粘液脓性分泌物。在严重病例中，阴道粘膜被假膜和溃疡覆盖。怀孕的牛一般不会流产。病程约2周（
（III）传染性龟头包皮炎，龟头、包皮和阴茎充血，有时可看到阴茎弯曲或溃疡形成。精囊腺变性坏死多见。通常在病变发生后一周开始愈合，大约需要两周才能完全恢复. 患病3-4个月后，公牛可以及时被淘汰，但它们可能会失去繁殖能力（
（IV）角膜结膜炎常与上呼吸道炎症合并发生。疾病开始时，由于眼睑水肿和结膜高度充血、流泪，轻度角膜混浊，一般无溃疡，无明显全身反应。严重者结膜可见大的灰黄色针状颗粒，导致眼睑粘连和结膜外翻。眼睛和鼻子分泌的浆液性或化脓性分泌物（流产通常发生在新生幼牛怀孕的任何阶段，有时发生在月经期的母牛。通常分娩发生在怀孕的第5-8个月，其中大部分发生在h无前驱症状。大约50%的流产牛保留了胎盘，而流产的胎儿在出生后2-3周内没有特征性肉眼可见的病变（
（VI）感染[1]非妊娠的原因（
上述症状往往不同程度地同时存在，很少单独发生（
发病机制和病理变化
病毒常侵入通过上呼吸道黏膜和生殖道黏膜，也可通过眼结膜上皮和软壳蜱。是否通过口腔感染尚未得到证实。病毒通过上呼吸道侵入，沿粘膜、神经纤维和淋巴管扩散到邻近部位，引起呼吸道感染预防上呼吸道炎症和结膜炎。尽管血液中的细胞成分在病毒复制和扩散中起着重要作用，但很少观察到病毒血症。在病毒血症期间，病毒可侵入深呼吸道、中枢神经系统和胎牛，并在这些部位引起病变，表现为发热性全身呼吸器官疾病、脑膜脑炎或流产。由于条件致病菌容易在发炎的粘膜中繁殖，因此有时可能发生继发性炎症病变，如肺炎（
呼吸道病变表现为上呼吸道粘膜发炎，窦内充满渗出物，粘膜上覆盖假性肺炎由粘液和恶臭渗出物组成的膜。在极少数情况下，肺小叶间水肿、肺炎一般不会发生。组织学检查显示粘膜表面有中性粒细胞浸润，粘膜下层有淋巴细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润。在疾病早期，在气管上皮细胞中发现Cowdry a型包涵体（
。受影响的消化道显示颊粘膜、唇、牙龈和硬腭溃疡（不同于粘膜疾病），在食管、前胃和真胃中可以看到相同的病变，肠道卡他性炎症。组织学检查显示上皮细胞空泡变性，派尔氏细胞坏死肝内斑块、坏死灶和核内包涵体（
生殖道型病例显示外阴、阴道、宫颈粘膜、包皮和阴茎粘膜炎症，某些病例可发生子宫内膜炎。组织学检查显示大量中性粒细胞聚集在坏死区，周围组织淋巴细胞浸润，并可检测到包涵体（
。流产胎儿肉眼可见的变化几乎是死亡后引起的。组织学检查显示弥漫性局灶性坏死多见于肝、肺、脾、胸腺、淋巴结和肾脏。由于胎儿物质在死亡后排出，许多包涵体因机体自溶而消失，w脑膜脑炎患者除脑膜轻度充血外，视力无明显改变。组织学检查显示淋巴细胞性脑膜炎和以单核细胞形成的血管鞘为主的病变（
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