波尔山羊冷冻精液的制作及受胎效果试验数据
为有效提高波尔山羊育种水平，开展波尔山羊杂交育种和新品系选育，有效利用波尔山羊种质资源，开展了波尔山羊冷冻精液生产和受孕试验。在一审的基础上，进行了集中审理。在江苏省、山东省、河南省9个县的47个繁殖站（点）共输注冷冻精液4204头母羊。第一发情期受孕率为71.21%。结果如下：
1，材料与方法
1.1精液采集。精液颜色和气味要正常，pH值要在6.4-6.8之间，密度在每毫升15亿以上，生命力更强小于0.75。精液按1的比例稀释∶ 2-5根据密度和活力（
1.2稀释剂A:乳糖6g，柠檬酸钠1.5g，蒸馏水100ml.式B:乳糖3.8g，葡萄糖2.6g，柠檬酸钠1.3g，蒸馏水100ml.式C:乳糖4.6g，葡萄糖3.1g，柠檬酸钠1.5g，蒸馏水100ml.取式A 80ml，B和105 ml配方C，分别加入20 ml蛋黄、5 ml甘油、10万单位青霉素和10万单位链霉素（
1.3平衡稀释后的精液置于冰箱下层1-4℃（ (采用铝盒氟板冷冻法制备
）
1.4冷冻精液颗粒。氟板浸没在装有液氮的铝盒子里。停止煮沸后，取出氟板，置于液氮上方2-3cm处。剂量为0.1ml/粒（
1.5解冻采用水浴快速解冻。将0.5ml含1.8-2.9%柠檬酸钠的解冻液置于试管中，45-60℃温水浴℃ 一分钟。将冷水颗粒放入试管中，摇匀至2/3后取出，轻轻摇匀至全部溶解（
1（
2，试验结果
2.1稀释剂的选择
采用三种不同的稀释剂进行冷冻效果对比试验。从解冻成活率和恢复率两个指标来看，配方C效果最好，重复性好d解冻成活率高达45%以上。与甲、乙双方比较，差异极显著（P<0.01）。结果见表1
表1不同稀释液冷冻效果比较（单位：%）
配方代码
重复次数
原生质精子活率
冻前活率
解冻活率
重建率
配方a
8）
）65
65
22
29.73
656565
）83
65
65
65）65
）））））22 22）22 22 22
22
22
22
22）22 22 22 22 22
22
22 22 21
61.97
2.2冻结技术试验
2.2.2.1不同的平衡时间对冻结效果的影响是在使用尿素的条件下进行的在冷平衡条件下，15分钟、30分钟、1小时、1.5小时、2小时和3小时的精子回收率分别为46.67%、52.63%、64.52%、60%、60.8%和55.17%。1小时的解冻率最高，15分钟和30分钟的解冻率最低。随着平衡时间的延长，融活率逐渐延长，融活率逐渐降低（
2.2.2在氟板为1，2，在离液氮表面3cm和4cm处，分别冷冻活率为0.75和平衡后活率为0.7的精子。重复观察15次，冷冻后的运动能力分别为0.4、0.55、0.45和0.4。离液氮面2cm处冷冻效果最好，精子回收率为75.86%，分别比1cm、3cm和4cm高20.69%、13.79%和20.69%，但差异不显著（P>0.05）（
2.2.3用35℃的水温研究了不同水温对冷冻精液解冻活性的影响℃, 40℃, 45℃, 50℃, 55℃, 60℃, 65℃ 和70℃ 结果表明，在45～60℃范围内，冻融效果较好℃ 74.6%，与35岁时比较有显著性差异℃ (P<0.01），与65岁时无显著性差异℃ (P>0.05）但与70岁时相比有显著差异℃ (P<0.05），说明低水温或高水温不利于精子的恢复（
2.2.4不同浓度解冻液对精子存活指数的影响。30℃保存活力大于0.5的精液℃. 结果表明，含1.3%、2.2%和2.9%柠檬酸钠的解冻液的存活指数分别为2.8、3.6和3.2，含2.2%枸橼酸钠的解冻液的存活指数最高
3.受孕效果试验
用配方C稀释液配制的冷冻精液颗粒对母羊进行受孕效果试验，取新鲜精液和自然交配对照组为对照组。结果表明，冷冻精液组第一发情期受孕率为71.21%，新鲜精液组为75.24%，自然交配组为75.56%，冷冻精液组的受孕率分别比新鲜精液组和自然交配组低4.03%和4.35%，但差异不显著（P>0.05）。结果见表2（
表2：冻精
组
试验型
颗粒型
种羊数
调查羊数
受胎羊数
受胎率
产羔数母羊
产羔数
试验
组
co青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙青蛙FRO
54
2 16.00
先导试验
波尔山
波尔山
波尔山
波尔山
波尔山（波尔山）波尔山
波尔山
波尔山
波尔山
波尔山（波尔山）波尔山
波尔山山
波尔山山
波尔山
波尔山山
波尔山山
波尔山山
波尔山
波尔山
波尔山山山山（波尔山山山山山（波尔山）波尔山山（波尔山山山山山山山山山山（波尔山）波尔山（波尔山山）波尔山（波尔山）波尔山（波尔山）波尔山（波尔山山山山山山山（波尔山山山）山山（羊（羊
波尔2121
小计
4204
2122
1511
21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 212121本地山羊
34
34
75.56
34
74
211.43
3.1 infl年龄和胎次对母羊受孕效果的影响基本一致，因为母羊的年龄和胎次呈强正相关。按1岁以下、1-2岁、2-3岁和3岁以上年龄分为4组，第一发情期冻精受胎率分别为63.04%（46/29）、76.89%（212/163）、71.08%（83/59）和63.79%（58/37）。母羊按头三胎、第四六胎和六胎以上的孕龄分为四组。受孕率分别为62.69%（67/42）、74.38%（160/119）、72.11%（147/106）和68.00%（25/17）。前3次妊娠的受孕率以1～2岁组最高，其次为2～3岁组不同授精方法对受孕的影响受孕率为78.76%，不同粒数对受孕的影响：38头母羊用2粒宫颈受精，30头母羊受孕，受孕率为78.95%。对59只母羊进行了单颗粒宫颈人工授精试验，结果表明：41只母羊妊娠，受胎率为69.49%，前者比后者高9.46%（P>0.05）波尔山羊氮按1的比例稀释∶ 50只，每只绵羊0.5ml可保持较高的受胎率，冷冻精液颗粒用0.5ml解冻液重新稀释，使母羊有效精子数约为2000万（1粒）。受孕率仍为69.49%，但较4000万粒（2粒）低9.46%（P>0.05），与新鲜精液相似。因此，建议波尔山羊冷冻精液颗粒中有效精子数应为3000-4000万（
4.2在波尔山羊冷冻精液颗粒的制作过程中，必须保证平衡后精液温度不升高，另外，冷冻精液颗粒的解冻活性较低n影响（
4.3由于母绵羊体小，使用开腔器难度大，使用阴道授精影响妊娠效果，有待进一步探讨。
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