鸡贫血病毒（CAV）是鸡传染性贫血（CIA）的主要病原。CAV不仅引起骨髓等造血组织萎缩，导致严重贫血甚至死亡，还引起胸腺等淋巴组织萎缩，导致免疫抑制（

自1979年日本首次报道该病以来，在世界主要家禽养殖国均有发现，如英国、丹麦、波兰、美国、澳大利亚、荷兰、巴西和阿根廷。该病毒于1992年在黑龙江省首次分离，随后在辽宁、吉林、山东、江苏和河南等省的鸡群中发现。该病在我国广泛分布它直接或间接地给世界禽业造成了巨大的经济损失。本文对该病的诊断方法

和临床症状

进行了综述。测定红细胞压积值。病鸡血液红细胞压积（HCT）显著降低，各种血细胞数显著减少。严重者，HCT值可降至10%以下，血细胞数可降至1× HCT是实验室常用的CIA诊断指标。一般认为HCT低于27%为CIA（

2）的发病2.1病毒分离

无菌手术可用于收集疑似病例的肝、胸腺、骨髓、脾脏等组织。采集的样品用灭菌的PBS研磨，然后在37℃下处理℃ 终浓度为1000iu/ml的双抗体30min，反复冻融3-4次，离心；上清液用50%体积的氯仿处理15分钟，不摇晃，然后在70℃下离心℃ 5分钟；22 0 μ M膜过滤，低温冰箱冷冻保存，等待病毒分离试验。用1日龄SPF鸡体内接种mdcc-msb细胞进行病毒分离。上清液用msbl细胞培养液接种滤过的病料可用于鸡贫血病毒的分离鉴定。接种病毒后，每2～3天传代一次，共传代4～7代。如果细胞肿胀，变大变圆，然后发生侧裂，细胞培养基不再变色，不能使用，进一步传代可以证实CAV的存在。Msbl细胞也可用于鸡贫血病毒的效价滴定。病毒经连续稀释后接种msbl细胞，在细胞板上连续传代4代以上，观察细胞病变情况。一代后，荧光抗体可用于检测是否存在鸡贫血病毒

2.2病毒鉴定

病毒可采用间接荧光法进行鉴定。取敏感动物实验感染鸡的肝组织冰冻切片，在显微镜下观察CAV阳性切片（在

CAV阳性细胞涂片上，荧光标记，荧光显微镜下可见mdcc-msbl细胞肿胀，细胞核内可见颗粒状或弥漫性荧光标记。荧光标记细胞的数量与病毒株的传染性有关。阳性对照组也有同样的结果。荧光标记细胞约占30%～60%，ne内未见荧光颗粒阴性对照细胞（

3血清学诊断

感染CAV的1日龄雏鸡产生的中和抗体可维持20周，10周龄以上成年雏鸡产生的中和抗体可维持10-63周（一般超过44周）。然而，目前的研究表明，CAV感染鸡血清中和抗体效价较低，最高值为1∶ 5120和最小值1∶ 20.低水平的母体抗体能有效抵抗CAV感染。病毒中和试验（VN）、间接荧光抗体试验、免疫过氧化物酶试验（IFA）和ELISA可用于检测血清和卵黄中的抗体d 2级× 10e3cedso或200tcid50病毒等体积混合，37℃ 1小时或4小时℃ 隔夜，然后肌肉注射给1日龄鸡14天；或msbl细胞连续传代7代以上，细胞代谢仍然活跃。如果检测到大量血清样品，一般采用微量VN反应法。有时稀释度较低的血清对细胞有毒性或易引起病毒的非特异性抑制。VN法的灵敏度高于其他血清学方法。CAV感染鸡的中和抗体持续时间明显长于IFA感染鸡。这种方法有两个局限性：（1）必须用c至少培养7代msbl细胞以获得血清终点滴度（2）VN法不适用于某些不能在msbl不同亚系上复制或生长不良的CAV株（

3.2间接荧光抗体试验（1fa）mdcc-msbl细胞培养获得的病毒可作为细胞抗原检测血清。抗原可与CAV阳性血清反应。荧光标记的抗鸡IgG可显示。荧光显微镜下，肿胀核区出现细小不规则的荧光染色颗粒或环状结构，可判断为抗体阳性。但有必要建立严格的阳性血清、阴性血清和非CAV感染细胞作为对照排除非特异性荧光和背景染色可掩盖特异性反应（

3.3 ELISA试验

可直接用ELISA平板包被部分纯化的细胞培养病毒或用单克隆抗体平板捕获细胞培养中的病毒来检测血清抗体，它们都已用于生产商用药盒。但由于病毒复制量小、成本高，难以大规模生产和推广。Kling（1991）、Otaki（1991）和Wang Xiaomei（1998）建立了以病毒感染细胞或裂解液上清液为包被抗原的ELISA方法。Pallister（1994）用大肠杆菌表达的重组VPL建立了间接ELISA，Kato（1995）建立了i1wata（1997）利用在大肠杆菌中表达的lacz-vp3重组体建立了在昆虫细胞VN等中表达VP2和/或vp3的ELISA。因此，由于CAV株基因序列的保守性，将体外表达的CAV基因纯化产物作为ELISA检测抗原用于鸡血清抗体的检测，证明是一种特异、灵敏的CAV血清学诊断方法，随着新的分子生物学方法的发展，为生物技术

4诊断开辟了一条新途径，应用PCR、核酸探针和第二代ELISA检测CAV。PCR可用于检测CAV抗原。C.有人（1993）报道PCR可用于检测cavdCAV感染鸡组织或细胞中NA的含量。Noteborn等人利用同位素标记的克隆CAV基因组作为探针进行杂交实验，能够在不同菌株感染的细胞中检测到双链复制型和单链环状CAV基因组。Todd等人用P32标记的克隆CAV-DNA片段作为探针，检测CAV感染鸡组织中的特异性DNA。随后，noteborn等人用非放射性地高辛标记探针成功地检测到了几个CAV分离株。1995年，Nielsen等人利用生物素标记的双链DNA探针进行原位杂交，不仅可以检测人工感染鸡的CAV，而且可以检测感染鸡

的cavdnar为满足检测灵敏度的需要，CAV特异性PCR技术充分体现了其在实验室诊断和疫苗检测中无可比拟的优势。它不仅与病毒分离法一样敏感，而且可以检测高背景DNA中的CAV分子。Soine等人采用套式PCR（multiple primers）方法扩增CAV基因，该方法可与特异性探针杂交，但易引起假阳性结果。CAV感染的剂量直接影响其致病性，因此检测敏感细胞或组织中病毒的含量尤为重要。Dren等人利用热启动PCR技术不仅克服了上述缺陷，而且成功地检测到一个感染细胞，相当于10tcids0cAV分子（

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