蛋鸡巴氏杆菌病的诊断与防治
2004年11月15日，溧阳市某养鸡场2000只150日龄罗马蛋鸡被感染。主要症状为抑郁、羽毛松脱、缩颈闭眼、缩头下翅、常独立自主、不愿活动；有的腹泻，排出绿色稀粪，肛门沾有稀粪；食欲不振或浪费，饮用水增加；呼吸困难。口腔和鼻子里有粘液分泌物。粘液与泡沫粘液混合，张口伸颈，摇头，试图排出积聚在喉部的粘液。王冠和胡须都肿了，严重的是蓝紫色。几只病鸡突然死了检查前驱症状。病程短，一般发病后半天至一天死亡。第一天就有30人死亡，每天大约有50人死亡。治疗时，约有200人死亡，死亡率为10%。发病时用青霉素和链霉素治疗，病情缓解，但复发快。据了解，这些病鸡是从同一批次引进的。对鸡进行新城疫、法氏囊病、传染性支气管炎和禽霍乱免疫。在2个月大时，疫苗注射一次。对4只死蛋鸡进行实验室诊断，并制定防治措施材料与方法
1.1病料
从溧阳市某养鸡场4只死罗马鸡中采集病料；营养琼脂粉（购自中国药业集团上海化学制剂公司）和4只清洁ICR小鼠（来自扬州大学实验动物中心动物室）
1.2病理诊断
1.2.1大体病理观察：解剖死鸡并观察其病理改变（
1.2.2镜下观察：无菌手术：将病变明显的肝组织用10%中性福尔马林固定液固定，常规石蜡切片。组织切片用H.E.和examin染色显微镜下涂片（
1.3微生物学诊断
1.3.1细菌涂片：取病变肝组织经无菌手术制成涂片，用赖特染色液（
染色，具体操作如下：（1）涂片：肝表面经无菌处理后，用无菌剪刀剪下一小块肝组织，然后将新鲜切下的
表面压成薄片放在载玻片上。（
（2）擦干并固定涂片（
（3）染色：涂片固定后，根据涂片点的大小盖上一张稍大一点的干净滤纸，在滤纸上轻轻加入赖特染色液，直到滤纸稍微浸透，然后根据需要补液要因势利导，以免干涸；染色3次后，加入与染液等量的中性蒸馏水，轻轻摇动玻片使其与染液混合，3次后取下滤纸，直接用水冲洗、吸干，镜检（
1.3.2细菌分离：无菌操作采集病变组织，用血琼脂平板和普通培养基分离培养。第2天观察培养基的生长和菌落特征，显微镜下观察细菌的生长情况。具体步骤如下：
（1）制备营养琼脂（
（2）制备血琼脂（
（3）细菌分离培养：收集肝、心积液，分别包被于血琼脂和普通培养基中，37℃恒温培养℃ 24小时（4）克染色：在干净的玻片上滴一滴生理盐水，用接种环在培养基上挑出明显的菌落，在生理盐水上涂1层em2，在干燥固定的涂片上滴草酸铵结晶紫染色液，2-3分钟后用水冲洗，加入克碘媒染液，30-60秒，用水冲洗。重新染色30-60秒后，用水冲洗。吸干或自然干燥，显微镜下观察（
1.3.3动物接种试验：将有明显病理改变的无菌肝组织磨碎乳剂，接种于小鼠体内。第二天观察小鼠。具体步骤如下：
（1）接种小鼠：无菌条件下，将3号和4号鸡的肝脏切开，研磨（研磨机中加入无菌生理盐水），离心8000t/m，15min，离心两次，取上清，分别皮下接种1号和2号小鼠，每只小鼠接种0.2ml。第2天建立2只对照组（
（2），观察比较各组小鼠的行为。对接种后死亡的小鼠进行尸检
（3）取血或肝组织涂片，赖特染色，观察形态学变化细菌的特性。将心血、肝脏等病变材料接种于血琼脂培养基中，研究其生长和菌落特征（结果
2.1病理诊断结果
2.1.1大体病理观察：尸检主要病理改变为肝脏肿大，易碎，易破裂，散在的灰白色坏死点，表面有大针。其中4/4冠肿胀发紫，2/4胡须出血，1/4喉充血，2/4气管粘液分泌，3/4心包积液，4/4肺充血充血，4/4肝脏肿胀坏死，2/4脾脏肿胀坏死，4/4卵巢出血，3/4肠出血（
2.1.2结果：肝组织内有大量由坏死肝细胞和炎性细胞组成的凝固性坏死灶。Bad
死灶表现为肝细胞胞浆凝固，细胞核解体，2.2.1细菌涂片：镜检示涂片中有大量双极性浓缩卵形小杆菌（
2.2.2细菌分离：37℃培养24小时后℃ 在培养箱中，细菌不在普通培养基上生长，而是在血琼脂上生长出许多浅灰色、圆形、湿润、露珠状的小菌落，没有溶血区以及殖民地。此时将典型菌落制成涂片，用革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性两极浓缩短杆菌（
2.2.3动物接种试验：接种的两只小鼠24小时内死亡，对照小鼠健康存活。小鼠急性死亡，外观正常。死后检查，接种区皮下组织水肿，1号小鼠（接种3号鸡肝研磨液）病理变化不明显；2号小鼠（接种4号鸡肝研磨液）病理变化明显，皮下组织有出血点，肝组织肿胀、肿胀清脆，肝表面散在灰白色和针状大坏死斑。无菌手术取2号小鼠肝组织作涂片，赖特染色液染色。肝组织接种于血琼脂中，于37℃孵育℃ 24小时。可见血琼脂中有许多浅灰色、圆形、湿润、露珠状的小菌落，菌落周围无溶血带。涂片由典型菌落制成，并用Wright染色显微镜检查显示有两极密集的小细菌染色。根据上述临床症状和病理变化，结合实验室检查结果根据该病的流行病学特点和病原菌的特点，确定了防治措施和效果，对该养鸡场制定如下处理措施：
3.1从同一组病鸡中分离病鸡，同一组分离健康鸡。观察一周后，如无新病例
出现，重新注射疫苗（
3.2加强饲养管理，定期对鸡舍和饲养用具进行清洁和彻底消毒，及时清除粪便（
3.3对死鸡应进行集中处理、烧伤或深埋ly（
3.4病鸡每日注射灭百灵注射液2次，连续3d。3.5恩诺沙星粉或盐酸环丙沙星20g/100kg饲料，3-5天。在显著降低鸡的死亡率后，继续治疗2～3d，巩固疗效，防止复发（
用恩诺沙星或盐酸环丙沙星合剂预防健康鸡3.5只。同时在饮用水中添加0.1%的维生素C以减轻应激，提高
组的抵抗力。采取上述措施2天后，病死率明显降低，5天后病情得到控制，从每天死亡50只鸡开始，一直持续到死亡每只鸡的数量。10天后鸡群恢复正常（综述与讨论
4.1根据鸡群的流行病学、临床症状、病理变化及实验室诊断结果，确定该养鸡场的传染病为禽霍乱，并用灭百灵治疗，恩诺沙星和盐酸环丙沙星（
4.2本病的发生正值秋冬交替季节，天气变化剧烈，多雨，应加强饲养管理，减轻应激，提高鸡的抵抗力。这些鸡接种了禽霍乱疫苗，但仍然生病，说明免疫失败。第主要原因是不完全豁免。由于多杀性巴氏杆菌有多个血清群，这些血清群之间没有完全的交叉保护。因此，有必要根据当地常见的血清群从同一种中选择血清群，接种相同血清群的菌株。最好的方法是将病鸡的肝匀浆制成局部或同组疫苗，注射到局部或同组鸡体内。效果理想，免疫期较长。该病在养鸡场暴发后，用青霉素和链霉素进行治疗，但效果不明显，且病情复发快，说明多杀性巴氏杆菌有药物治疗作用抵抗。因此，发病时应及早诊断，准确用药。在治疗过程中，应合理用药，必要时应补充或更换新药（
4.3目前，我国禽霍乱多发的主要原因有：
（1）引进多杀性巴氏杆菌：引进受感染的鸟类或种蛋；被污染的蛋盘和饲料感染；病原携带者的出入境（
（2）接种疫苗的保护率低，免疫期短（
（3）感染是由感染禽类、病禽及其污染物接触引起（
（4）免疫效果差（p程序不合理
（5）由于某些原因，没有使用禽霍乱疫苗进行免疫
（6）禽霍乱爆发后，用药物治疗，但其他综合防治措施跟不上，导致复发，因此，在家禽的某些部位（如上颌裂）发现了病原菌，这些部位在
病后未感染或存活。在气候突变、家畜密度过大、日粮缺乏维生素、蛋白质含量不足等应激因素的作用下，病原菌在感染或慢性病的禽类中大量繁殖多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）是危害家禽的一种重要病原菌。近年来，随着养鸡业的发展，禽类
杆菌的暴发也呈上升趋势。由于其发病率高、死亡率高，给农民造成了巨大的经济损失。但只要能加强对鸡的饲养管理，平时严格执行养鸡场兽医卫生防疫措施，采取以建筑物为单位的“全进全出”的饲养制度，完全有可能防患于未然加强饲养管理：实行严格的隔离消毒制度，实行全进全出制度。每天定期清理鸡粪，在养鸡场人口处设置消毒池，对进出养鸡场的车辆和人员进行消毒；定期对鸡舍进行碘消毒或100只中毒鸡，定期对鸡进行消毒，及时对鸡进行消毒和消除，加强对死鸡的无害化处理。所有的病鸡和死鸡都埋得很深。固定饲料配方，如遇气候突然变化，及时服用预防性剂量的抗生素等如氯霉素、灭百灵和磺胺类。避免拥挤和寒冷，消除可能降低身体抵抗力的因素；非疫区、无禽霍乱的新农场和老农场，不要使用减毒疫苗，以免引入致病菌（
4.4.2定期接种：在频繁发生的地区，药物治疗效果下降，疾病难以得到有效控制，因此，有必要使用疫苗进行预防。接种应在夜间进行，并在接种前后3天向饲料中添加维生素C和维生素E，以减轻应激。免疫前、后5天应禁用抗生素，否则免疫无效效果会受到影响。减毒疫苗和灭活疫苗有g190e40、833和b26t1200。一般在6-8周龄进行第一次免疫，10-12周龄进行第二次免疫；禽霍乱灭活疫苗包括灭活氢氧化铝疫苗和灭活油乳剂疫苗。疫苗一般在10～12周龄开始免疫，16～18周龄通过颈部皮下或肌肉注射加强一次。但这些疫苗的免疫期并不长，一般为3-6个月，且应激反应相对较强，对产蛋有一定影响。目前，有一种很好的蜂胶我国禽霍乱活疫苗安全可靠，0℃保存2年，注射方便，不影响产蛋，无毒副作用，能有效防治该病。如果条件允许，可以从农场中分离出细菌。经鉴定，可制成灭活疫苗，定期给鸡注射。通过1～2年的免疫（
4.5）证明该病是可以有效控制的。发病时，对病鸡进行隔离和严格消毒，并对病鸡进行封闭。同一组假想健康鸡被隔离观察一周。如果没有新的病例s、 他们又接种了疫苗。对病鸡，接种2周后可使用禽霍乱野疫苗，无新病例（
4.6鸡发病时应立即采取治疗措施。在条件允许的情况下，应通过药敏试验选择有效药物进行全民给药。许多药物对本病有一定疗效，但停药后易复发。另外，长期用药，细菌会产生耐药性，所以一定要增加或更换新药，防止一种药物长期重复使用。常用药物有：
（1）磺胺类药物：磺胺嘧啶（SP）或磺胺甲基嘧啶（SM2），浓度为0.4%-0.5%每天两次；磺胺喹喔啉（SQ），0.1%浓度，连续喂养2-3天，间隔3天，添加0.05%，喂养2天，停药3天，然后喂养2天（0.005%~0.01%喹乙醇，3-5天（
（3）环丙沙星，恩诺沙星，以0.005%～0.01%的浓度混匀3～5天（
（4）用0.1%氯霉素混匀3～5天）。口服庆大霉素2～4万U/L水，连续3～5天
（5）滴君净30mg/kg体重。第一次剂量加倍，每天两次，持续2-4天。治疗过程中，剂量要足，疗程要足。当鸡的死亡率显著降低时，药物sh持续2-3天，巩固疗效，防止复发。
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