舒巴坦对氟喹诺酮类药物体外抗菌活性的影响实验
随着抗生素的广泛应用，耐药菌株显著增多，成为临床传染病防治的主要障碍。产生扩展频谱β- 扩展光谱β- 内酰胺酶（ESBLs）是一种细菌对细菌的代谢产物β- 内酰胺耐药最重要的机制是它能水解氧氨基头孢菌素和氨曲南，但也可作为药物使用β- 内酰胺酶抑制剂对其有抑制作用。产超广谱β-内酰胺酶的细菌β- 它不仅对内酰胺类抗生素耐药，而且对氟喹诺酮类、氨基糖苷类、氟苯尼考、多西环素等具有多重耐药性。采取β- 内酰胺环类抗生素及其应用β- 舒巴坦钠actamase抑制剂，能显著提高其对ESBLs的抗菌活性。为研究酶抑制剂舒巴坦钠对大肠埃希菌（E。进一步筛选鸭源大肠杆菌，为大肠杆菌的防治提供理论依据。产超广谱β-内酰胺酶鸭大肠杆菌感染（材料与方法
（1）材料
12株鸭大肠杆菌（分离自药理学实验室：产酶菌yc1-yc6，非产酶菌yb1-yb6，经法国bioMerieux Vitek32细菌自动鉴定仪鉴定）；质控菌株为大肠杆菌ATCC25922（中国微生物菌种保藏中心提供）为了β- （Klebsiella pneumoniae）ATC77603（由北京大学医学部提供，作为ESBLs阳性对照菌）（
培养基MH培养基（青岛高新技术园区海博生物有限公司，批号20080108），McConkey培养基（北京通用生物有限公司，批号：20081223），MH培养基（北京奥博生物科技有限公司，批号：20080210）、GN富集培养基（广东环凯微生物科技有限公司，批号：20080216）（
主要设备：电子分析天平、dzf-6050真空干燥箱、防水电恒温培养箱、pqt-115音响冰箱、，yxqg02便携式电动压力蒸汽灭菌器，90-1双向nal磁力搅拌器、格兰仕微波炉、超净台、spx-150-z摇瓶培养箱（恩诺沙星94%）；乳酸环丙沙星（93%）；美托沙星（98.5%）；盐酸左氧氟沙星（89.92%）；克林氧沙星（90%）；丁胺卡那霉素（60%）；新霉素（85%）；头孢曲松钠（85%）；舒巴坦钠（85%），以上药物均为国产（
（2）方法
1.多重耐药菌株的筛选
抗生素储备液的制备：抗生素储备液浓度为512μ g/ml，称取适量药物，其中美托沙星、恩诺沙星、克林氧沙星不溶于水，用0.1mol/L氢氧化钠助溶，稀释其余抗生素用高压蒸馏水溶解于水中，无菌操作下用无菌蒸馏水溶解稀释，制备10ml抗生素储备液，储存于4℃ 冷藏一周（
菌液的制备：首先将标准菌株接种于新鲜肉汤培养基中，在37℃培养℃ 恒温环境12小时，接种于MacConkey琼脂平板上。37℃培养12小时后℃, 选取单个菌落接种于5ml的GN富集培养基中，37℃培养℃ 12小时，使用前稀释10000次（
材料：聚苯乙烯微孔板，8× 每块板的尺寸为12厘米，each板为8排，每排12孔，每孔0.20mL，孔底为V形。细菌生长时聚集在孔底，有利于观察结果。微量移液管，50-300μ 五十、 可自由调节（
测定方法：60μ 用标准微量二倍稀释法，在96孔V形板的第一孔中自上而下依次加入1种药物，10μ 吸取1 l菌液，用蒸馏水按1:1000的比例稀释，60μ 用彩色8CH微量移液管从平板上吸取1 l菌液，加入第一个孔中，然后加入60μ 我被吸了出来，加入第二个洞，稀释两倍到第11孔采用相同方法，第12孔作为阳性对照。则每管的浓度为256、128、64、32、168.4、2、1、0.5、0.25μ g/ml，37℃培养℃ 18小时，然后观察结果，舒巴坦钠对氟喹诺酮类药物抗菌活性的影响
抗生素原液的制备：氟喹诺酮类药物与盐酸左氧氟沙星混合制成复方药物，美托沙星与乳酸环丙沙星按2:1的比例，在无菌操作下用无菌蒸馏水溶解稀释，制成10ml抗生素储备液，可存储在4℃ 冷藏一周（
供试菌株悬浮液的制备：无菌操作下，用接种环挑出在McConkey培养基中生长良好的菌落，接种于GN富集液中，在37℃培养过夜℃ 培养箱（
细菌稀释：将上述菌液用MH肉汤稀释10000倍（
最低抑菌浓度（MIC）测定：筛选出的多药耐药菌株用GN富集液在37℃培养过夜℃, 然后用MH肉汤稀释10000倍。其它方法同上述mic实验
结果和分析
（I）多药耐药菌株的筛选结果
9种抗生素对鸭大肠杆菌的MIC结果见表1，鸭大肠杆菌对9种抗生素的耐药率见表2（
表1 9种抗菌剂对鸭大肠杆菌
的MIC结果从表1可以看出舒巴坦能显著提高头孢曲松对产酶菌株的抗菌活性，但不能提高非产酶菌株的抗菌活性，因为舒巴坦钠最有效β- 内酰胺酶抑制剂，能抑制细菌的产生β- 内酰胺酶水解或灭活抗生素的研究
表2鸭大肠杆菌对9种抗生素的耐药结果otics
（单位：微克/毫升）
按表2判定标准，Yc1、yc3、yc4、yc5为多药耐药菌株。从表2可以看出，氟喹诺酮类、氨基糖苷类和头孢菌素类的耐药性不同。氟喹诺酮类药物除克林氧氟沙星外耐药率为16.7%，其他药物耐药率不低于50%。氨基糖苷类药物的耐药率高于其他药物，头孢菌素类药物的耐药率较高。本实验筛选的4株菌株均为产酶菌株，均能产生灭活酶，使细菌产生耐药性。舒巴坦钠可以用来消除这种干扰。对于产酶菌株，Yc1，yc3，通过比较耐药率标准（
（II）舒巴坦对氟喹诺酮类药物抗菌活性的影响（见表3）
表3舒巴坦对氟喹诺酮类药物抗菌活性的影响结果（单位：微克/毫升）
，选择yc4和yc5为多药耐药菌株
从表3可以看出，舒巴坦能增强氟喹诺酮类药物的抗菌活性，但舒巴坦能使环丙沙星对Yc1的抗菌活性提高8倍，其他药物能使氟喹诺酮类药物对所选多重耐药菌的抗菌活性提高2倍（结论
1）f多重耐药菌株。比较头孢曲松钠对不同菌株的MIC值。结果表明，6株非产酶菌株对头孢曲松钠极为敏感。并非所有产酶细菌都是多药耐药细菌。所谓对三种抗生素的耐药性，并不意味着三种抗生素中的所有药物都应具有耐药性。细菌耐药的主要机制是灭活酶的产生、靶结构的改变、细胞膜通透性的降低、代谢途径的改变和转运泵的激活. 产ESBLs的E。本实验检测到的大肠杆菌具有多药耐药的特点。一个是E。大肠杆菌携带ESBLs质粒，并携带氟喹诺酮等抗生素耐药基因，使产ESBLs细菌具有多重耐药表型；二是ESBLs等特异性耐药机制与外膜通透性降低、主动外排等非特异性耐药机制并存，导致多重耐药。舒巴坦钠是一种特殊的、不可逆的药物β- 虽然内酰胺酶抑制剂本身几乎没有抗菌作用，但它没有抗菌作用β- 内酰胺类抗生素的联合应用能显著提高结果表明，舒巴坦钠不仅能提高第三代头孢菌素对产超广谱β-内酰胺酶鸭大肠埃希菌的体外抗菌活性，而且能提高其对产超广谱β-内酰胺酶鸭大肠杆菌的抗菌活性，但也能显著提高氟喹诺酮类药物的抗菌活性，这可能是由于舒巴坦钠抑制ESBLs后膜通透性的改变和主动外排的减弱，从而使药物对产ESBLs鸭大肠杆菌的抗菌活性相应增强。具体的分子机制值得进一步研究（
作者简介：刘宝光，（1983-），男，硕士研究生，主要研究生从事兽医药理学
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