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实验室检测在规模化养鸡生产中的应用

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近年来，我国家禽规模化、集约化、标准化养殖发展迅速，而传统农村散养模式所占比重越来越小，这是我国家禽业健康稳定发展向现代化迈进的大势所趋。在集约化养鸡企业兽医卫生防病工作中，实验室检测的作用日益突出，环境监测

定期监测养鸡场和孵化场的环境样品是及时了解和改善环境状况的重要技术措施。现在，越来越多的大型sca乐鸡企业，特别是注重动物福利的出口型企业，逐渐认识到环境监测的必要性和重要性（

1.1检测项目、采样种类和数量

细菌总数、大肠杆菌、葡萄球菌、，采集的环境监测样品应检出沙门氏菌和霉菌。一般来说，养殖户和孵化场每月检测一次，肉鸡每批检测一次。取样种类及数量见下表（表1）：

表1常用取样项目及数量

取样项目

水样

表面棉签

气垫

垫*

终止胚**

弱chick**

绒毛**

取样量

500ml/

6片/棚

5套/棚

50g/棚

30片/场

50g/孵化器

注：*代表种鸡场或肉鸡场的取样项目，**代表孵化场抽样项目，其余鸡场、孵化场抽样项目应采集（

1.2检测标准

环境监测样品检测标准一般采用企业内控指标或遵循国家标准，见下表（表2）：

表2环境监测样品检测标准

常用指标

水样

空气

表面棉签

铜

Vilus

弱小鸡的细菌总数

105/L

绒毛

Vilus

弱小鸡的细菌总数总数

105

105）105

105/1）105/10

绒

绒毛

弱小鸡）弱小鸡的细菌总数

弱小鸡的细菌总数

弱小鸡的细菌总数的细菌总数

的细菌总数

105（E2未检测

102/g

不得检出

沙门氏菌

不得检出

葡萄球菌

不得检出

未检测

模具

5 cells/cm2

102 cells/g

400 cells/g

无法检测

注：“

”

“表示未检测标准”

1.3 comm关于问题

（1）水样中微生物超标：表明水源地卫生条件差或饮用水受到污染，因此，应加强对水源（主要是生产中的井水）和饮用水系统的清洗消毒（

（2）不重视空房期的消毒工作：养鸡场空房期的消毒工作非常重要。对批发环节发生严重传染病的养鸡场（户），要把消毒工作放在首位。如果洗得好，床上用品消毒是关键。最好在把被褥放入垃圾桶前消毒鸡舍（

（3）孵化场检测结果超标：在孵化场环境监测中，消毒前种鸡蛋细菌污染往往严重，绒毛、软化水、加湿器水细菌总数常超标，这是生产中商品鸡早期死亡率高的一个重要原因，提示应严格控制孵化场的环境卫生。在鸡胚或弱雏鸡中检出细菌后，可进行药敏试验，可作为育种和商品鸡（

2细菌分离培养和产品药敏试验

的参考结论：死鸡、孵化终止胚胎或弱鸡尸检后可分离培养细菌，并进行药敏试验，指导临床用药　　2.细菌分离培养

临床常见细菌有大肠埃希菌、沙门氏菌、葡萄球菌和铜绿假单胞菌。常用的培养基有营养琼脂、血琼脂、麦康基培养基、伊红亚甲蓝培养基、三糖铁培养基、DHL培养基和SS培养基。在了解本病的临床表现和尸检的主要病理变化后，应根据t他得了一种疾病。通常采用营养琼脂或血琼脂加选择性培养基进行培养（

2.2药敏试验

常用的药敏试验方法有纸片法和试管法，其中圆盘法操作简便，应用广泛（

2.2.1药敏与抑制区的关系（见表3）

药敏与抑制区的关系

敏感性

不敏感性

低敏感性

中敏感性

高敏感性

极敏感

抑制区（mm）

<10

10~14

15~20

>20

2.2应注意的问题

药敏培养基的厚度试验应在5～6mm范围内，尽量避免钙、镁离子等拮抗物质；根据细菌生长数量选择菌落数。一般情况下，取细菌两次，并画线密集。如果摄入过多的细菌，抑制区会变小；不要将杂菌视为分离菌，否则会导致选药无效；在培养基中接种细菌后，以37℃培养为宜℃ 8-18小时（

（2）药物的浓度和总量直接影响抗菌试验的结果，因此需要准确制备。市售药品应严格按照建议制备终剂量（

（3）应用药敏试验结果时，应考虑给药途径、作用方式、饮水后肠道吸收率、副作用及敏感药物价格（

（4）对出口企业来说，药物残留控制是首要任务，严格执行“兽医处方制度”。在应用药敏试验结果时，不仅要考虑药物敏感性和吸收率，还要考虑药物敏感性，繁殖者通过卵子将药物传递给商业世代的可能性不容忽视（

3免疫监测

免疫监测指的是对ser的测定有计划地测定um抗体水平，评价人工免疫的实际效果，从而确定再次免疫的时间和措施。具有一定规模的现代养鸡企业要加强自身防疫体系建设，在科学的免疫监测指导下开展生产和疾病控制，免疫监测的意义

我们可以在免疫监测结果的指导下开展局部流行病学调查，评价免疫后鸡的免疫效果。同时，抗体的阳性与阴性或高、低变化也不明显因此流行性疾病诊断的重要依据（

3.2常用试验项目和方法（见表4）

表4常用试验项目和方法

试验项目

常用方法

nd、AI（H5、H9）、EDS、IC

血凝抑制试验（HI）

IBD、MD、，REO-ILT

琼脂扩散试验（AGP）

IBD，IB，CIA，ll，Mg，re，REO

酶联免疫吸附试验（ELISA）

Mg，MS，P/T

平板凝集试验（SPA）

3.3检测频率和采样量

一般认为抗体峰值出现在免疫后2周，抗体峰值出现在免疫后3-4周。免疫时和免疫后3-4周采血能正确评价免疫效果。健康的鸡每四周可检测一次。对于病鸡，采集发病后7至10天的样本进行检测。每棚采样比例可为0.6%，但每棚不少于15个样本，常规可采集20~30个样本（

3.4影响检测结果的因素

3.4.1试剂因素

（1）所用抗原应与疫苗株一致，而且不同批次的抗原之间存在差异，即使是同一批次的抗原，随着时间的延长，其降解速度也会加快（

（2）HI试验用红细胞应选用SPF鸡或非SPF鸡制备/低抗体鸡≤ 22），以及从高抗体鸡（ND-HI）制备的红细胞≥ 28）将导致略高的测试结果。如果红细胞浓度低，hi结果就会高。如果红细胞浓度高，hi结果就会低。一般以1%红细胞浓度为宜（

（3）冬季采血后，采血血管应放置在鸡舍内30~60min，以利于血清的释放，然后放入冰箱保存。血清送实验室后，离心后取血清进行检测（

（4）HI试验的最佳稀释液为0.01mol/l PBS等渗缓冲液，pH值为7.0~7.2AFter高压灭菌，以消除pH值变化对检测结果的影响（

3.4.2在一定的实验温度

下，随着温度的升高，hi结果会相应增加。一般来说，室温是合适的（

3.4.3实验仪器的因素

在实验中，与V形反应板相比，U形反应板更容易观察到病毒对红细胞的凝集作用，结果会略低于V形反应板，但它能较好地反映鸡的真实抗体水平（

3.4.4人因失误

，即使不同人员的实验程序完全相同，实验结果也会有差异ave错误。在充分条件下，同一人员最好完成同一项目的检测，以便于鸡抗体水平的纵向比较（

3.5在保证样品质量和取样数量的前提下，应注意的问题

（1），免疫监测还应具有时间连续性和阶段连续性。前者有利于同一批次间的纵向比较，后者有利于不同批次间的横向比较（

（2）任何血清试验的开展都应设立对照组，这是开展试验的前提。如果没有对照试验，试验结果没有解释性标志结论（

（3）常规血清学检测结果仅代表鸡的体液抗体（循环抗体IgG）水平，而Nd和IB活疫苗免疫后产生局部免疫的分泌性抗体IgA和IgM不能用常规方法检测。因此，用hi结果评价Nd和IB抗体水平是有限的（

（4）母体抗体过高不仅对Nd和IB的保护作用有限，而且对二者的活疫苗和灭活疫苗都有明显的干扰作用。但是，如果免疫提前到1日龄，鸡对野生病毒的抵抗力可以大大提高，说明1日龄免疫是必要的。A同时，在ND免疫后2周左右，鸡ND-HI滴度增加2个以上，说明免疫成功；如果nd抗体没有明显增加，说明免疫失败。此时，应尽快从鸡的健康状况、疫苗质量和免疫操作等方面找出原因，并加以补救（

（5）常用的nd和AI参考抗体水平为：nd-HI临界保护值26～27，产蛋鸡至少在29只以上；ai-h9的临界保护值为26-27，对蛋鸡的保护值至少为28；禽流感病毒h5的临界保护值为27，蛋鸡的抗体水平应较高她。一旦鸡群抗体低于临界值，应及时加强免疫（

（6）感染Nd场病毒后10天，肉鸡或种鸡/蛋鸡的Nd-HI抗体增加5个滴度，达到210个滴度；感染Nd场病毒后，蛋鸡的Nd-HI抗体在7-10天内增加2个滴度，3周内3次滴度，6周内5-6次滴度达到216或以上。在全进全出、生物安全性好的饲养场，常有新城疫病毒滚动感染，即先有一两个鸡舍发病，然后逐渐扩散到其他鸡舍，整个鸡场感染常需1-3个月。在生产中，鸡新城疫一旦发生，就不适宜开展再次紧急免疫，因为此时紧急免疫不仅无效，而且免疫应激会加重疫情。在这种情况下，应首先对（假设）健康鸡实施紧急免疫，然后对病鸡采取治疗措施。在操作良好的情况下，3倍量的Nd活疫苗紧急免疫也能取得良好的效果

（7）IBD的免疫受其母源抗体的影响较大）。对高抗母鸡，若延迟免疫3～4天，出现免疫失败，仍可使用中、强毒力疫苗。在规模化养鸡场中，ELISA可以被广泛应用用于检测1日龄鸡母源抗体的衰减。当ELISA抗体值为500时，可使用中到强毒力疫苗进行免疫，当ELISA抗体值为300时，可使用中毒力疫苗进行免疫，以确定适当的免疫时间，ELISA可用于检测12～16周龄种鸡CIA抗体转化率。如果受检鸡已感染野生病毒，则无需再次免疫；如果检测结果显示同一个鸡场的一些鸡舍抗体阳性，一些鸡舍抗体阴性将阳性鸡舍中的部分鸡或被褥材料放入阴性鸡舍中，自然感染阴性鸡舍中的鸡；如果整个鸡场的CIA抗体为阴性，则应在生产开始前至少6周用CIA疫苗进行免疫

（9）Mg和P/T平板凝集试验结果易出现假阳性，这通常与抗原的质量、血清保存时间的长短有关，血清是否反复冻融或污染，鸡是否接种过相关的灭活疫苗，鸡是否感染了大肠杆菌，因此，对试验的解释结果应结合鸡的临床表现。需要注意的是：Mg的血清学阳性反应一般出现在5～6周龄，而ELISA法检测的Mg灭活疫苗抗体与鸡自身的抗药性无直接关系，但可大大降低Mg的传卵率；P/T血清学阳性反应最早出现在6周左右。随着性成熟的发展，细菌活化，阳性率增加。阳性率高峰出现在35～40周龄。年龄较大的种鸡阳性率高于年轻的种鸡，强迫蜕皮的种鸡阳性率高于一般周龄的种鸡d鸡，当P/T阳性率过高（10%以上）或强阳性时，应用抗生素作对照（

4病理组织学方法

用于养鸡业，组织病理学方法常用于肿瘤疾病和能产生包涵体的病毒性疾病的初步诊断（

目前，MD、ll、j-al和re是鸡生产中常见的四种肿瘤疾病，但仅凭临床症状和病理改变难以鉴别真伪，目前常用组织病理学方法辅助诊断，其中石蜡切片应用最为广泛。以下是四种肿瘤的病理差异肝组织中的组织（见表5）：

表5肝组织中四种肿瘤组织的病理学差异

分类

生长方式

肿瘤细胞分类

细胞均匀性和大小

HE染色特征

浸润性生长

稀疏生长

中、小淋巴细胞